多種細胞計數和活率檢測影響因素的評估
Vi-CELL BLU細胞計數和活率分析儀，不僅具備了Vi-CELL XR細胞計數儀的主要功能，譬如可以實現不間斷上樣檢測，自動吹打混懸樣品，自動加臺盼藍吹打染色等。同時，Vi-CELL BLU融入了客戶提出的***些設計方面的改進建議，增加了96孔板高通量上樣檢測模式。
圖1、Vi-CELL BLU細胞計數和活率分析儀
（96孔板和24位轉盤）
細胞計數和活率分析看似簡單，但實際測試結果有時會受到來自樣品穩定性和儀器測試條件等多方面的影響。使用96孔板上樣檢測，可以在單次實驗中使用不同的實驗條件，幫助我們評估這些不同的條件對測試結果的影響。為了證實96孔板上樣模式的這些功能，我們使用了幾種細胞在不同的實驗條件進行檢測分析。
分析檢測的細胞
培養的CHO細胞（中***倉鼠卵巢細胞），EL4細胞（小鼠T淋巴細胞系），SF9昆蟲細胞（來自甜菜夜蛾卵巢組織）和HELA細胞（宮頸癌細胞）。
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不同重懸液的影響評估
細胞接種或做其他實驗之前的細胞換洗和濃縮過程中，離心和重懸是常用的方法。***般認為CHO細胞是比較好生長的，但有時它們也會有特別的生長要求，需要專門的培養基才能很好地生長。譬如，以下實驗中的CHO細胞通過1000g離心5min后（相對溫和的離心），在培養基或PBS緩沖液中重懸，然后評估不同細胞制備條件對細胞計數和活率分析結果的影響。
結果顯示：在推薦的培養基中離心和重懸對這種CHO細胞沒有明顯的影響。但是在PBS緩沖液中重懸對這種CHO細胞活率的影響很大，和平均細胞直徑***樣都明顯變小。同時，細胞濃度也有***些降低，可能是在重懸過程中對細胞造成了損傷。在PBS中的第二次離心和重懸對該細胞活率和直徑繼續產生負面的影響。
圖2、 CHO細胞樣品制備方法的影響
不同混合次數的影響評估
EL4細胞通常被認為是易碎的，而且即使在理想條件下生長也比較緩慢，并且活率***般<70%。我們制備了EL4細胞后分裝到96孔板中。細胞類型使用哺乳動物細胞參數，只是混合次數有所差異。目的是評估增加混合后細胞受到混懸和離心破壞的影響有多大。
根據EL4細胞的測試結果（如上表所示）可以看到：總細胞計數，總細胞濃度和直徑都沒有怎么變化，而活細胞數隨混合次數增加逐漸下降，因而細胞活率也相應下降。這表明對于這類細胞，減少吹打混懸和臺盼藍混合次數可能會更適合，過多的混勻吹打需要避免。
圖3、混合次數對EL4細胞的影響
不同檢測時間的影響評估
3.1 SF昆蟲細胞
即使在理想條件下SF9細胞生長要達到高密度也不容易，通常活率都在60%以下。因此96孔板測試導致儀器檢測總時間延長，可能會對排在后面的待測細胞產生負面影響。我們使用了標準昆蟲細胞的參數在96孔板上對SF9昆蟲細胞進行了評估。
結果顯示在測試的3小時過程中，細胞活率沒有檢測到有大的影響，細胞直徑也沒有太大變化，但如果細胞死亡或膨脹，這兩個參數是會改變的。雖然活率較低，但在離開細胞培養環境后比較長時間內并沒有不利影響，所以這些細胞足夠強壯。
圖4、SF9細胞離開培養環境后，
較長***段時間中表現出的活率和平均直徑
3.2 HELA細胞
讓HELA細胞生長成高度融合狀態產生脅迫效應，然后對細胞收集并重懸分散。再將細胞分裝到96孔板中，通過標準哺乳動物細胞類型測試得到分析結果。96孔板按每列的順序依次檢測，從而保證每行之間細胞檢測間隔時間是***致的。
注意到96孔板后面的樣品得到稍微更高的濃度。同時更多的研究發現，隨著時間的增加細胞的平均直徑會逐漸變大。
圖5、HELA細胞隨時間增加平均直徑增大的百分比圖
通過觀察得到的細胞圖像發現，細胞數量的增加看上去是膨脹或氣泡，同時還伴有許多非細胞顆粒。雖然通過細胞分析參數設置，后者（非細胞顆粒）通常不會對細胞計數產生影響，但它們可能被計數為小細胞。膨脹效應導致在3小時的檢測時間中（96孔板）平均細胞直徑增加大概10%，而且可能導致低于***小直徑閾值的小細胞也被統計到計數結果中。
圖6、從反應器中取出時間> 2小時，
HELA細胞照片中的膨脹和氣泡
小結
Vi-CELL BLU細胞計數和活率分析儀的 96孔板上樣檢測模式，不僅可以針對健壯和耐受力高的細胞做高通量分析測試。同時，針對比較敏感或脆弱的細胞，也可以做***些實驗條件的摸索和優化，以得到適合該細胞計數和活率分析的檢測方法，定制化的建立該樣品的細胞類型檢測和識別參數。
（文章來源于互聯網）
