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染色多孔板,怎么拍才好看?

2024-01-30 09:57:41



病毒噬斑實驗 (Plaque assay) 指的是用待測病毒感染宿主細胞后,在固體介質的限制下,從***初感染的細胞中釋放的病毒只能向宿主細胞周邊擴展,經過***段時間的增殖,感染病變細胞聚集的區域會形成空斑,即病毒噬斑。不同的生長條件,不同種類的病毒,其噬斑形態也有顯著差異。因此噬斑大小、分布,邊緣情況都可以提供有關病毒生長和毒力因素的有價值的信息。


其基本步驟為:

1

培養宿主細胞:在多孔板中培養宿主細胞,達到匯合度90%以上;

2

配制固體介質/固體覆蓋層:固體介質的配方多種多樣,常見配方包括,0.6%瓊脂糖,2%羧甲基纖維素 (CMC) 或2.4%膠體微晶纖維素 (avicel) 的水溶液,固體介質使用前需高壓滅菌;

3

病毒感染:將不同稀釋倍數的病毒感染液與宿主細胞進行共培養,***段時間后棄去病毒感染液,加入固體介質繼續培養;

4

固定,染色:先向孔板中加入10%甲醛溶液,固定后棄去甲醛溶液,再加入0.5%結晶紫染液染色,待染液充分滲透后,用清水洗去浮色;

5

拍照并分析:用成像設備對多孔板進行成像,對每孔的噬斑數進行計算,對相同稀釋倍數的復孔取平均值以計算病毒滴度,計算公式為:噬斑形成單位 (PFU/mL) =平均噬斑數/(病毒感染液稀釋倍數×病毒感染液體積 (mL) )。




新的知識增加了,下面讓我來教你怎么拍出好看的孔板圖片吧!


***先,從機器里拿出我們平時拍WB的黑色樣品盤和白色墊板,拍多孔板要用的是底部透明的這款透明樣品盤。將多孔板放置在樣品盤中間,將透明樣品盤推入IQ800的下層樣品倉,選擇Colorimetric模式中的OD measurement,點擊start進行拍攝就好啦。


圖1:從左到右依次為透明樣品盤、NP透鏡、NP透鏡導軌 


(文章來源于儀器網)

(來源:


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