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全自動冰凍切片機的操作指南

2025-06-13 09:15:00

全自動冰凍切片機操作指南:從樣本制備到安全規范  

***、儀器用途與原理概述  

全自動冰凍切片機通過低溫冷凍(-20℃~-30℃)固定組織樣本,利用高精度切片刀將冷凍樣本切成5-10μm的薄片,適用于病理快速診斷(如術中冰凍病理)、免疫熒光染色等場景。其核心原理是通過低溫抑制細胞自溶,保持組織形態結構完整。  

二、操作前準備:環境與樣本預處理  

1.儀器環境要求  

溫度:實驗室室溫控制在18-25℃,避免空調直吹儀器導致溫度波動。  

電源:使用穩壓電源,接地良好,防止靜電干擾。  

清潔:用75%乙醇擦拭切片機臺面、樣本托、刀片架,避免樣本污染。  

2.樣本預處理  

組織固定:新鮮組織需在30分鐘內處理,去除多余脂肪和壞死組織,體積不超過1cm×1cm×0.5cm(過大易導致冷凍不均)。  

冷凍劑準備:常用OCT包埋劑(optimalcuttingtemperaturecompound),或異戊烷+液氮(適用于特殊樣本)。  

三、詳細操作步驟:分階段標準化流程  

1.開機與溫度設置(以LeicaCM1950為例)  

開機順序:  

接通電源,打開主機開關,等待系統自檢(約2分鐘)。  

在觸摸屏設置冷凍艙溫度(常規-25℃)、樣本托溫度(-30℃),預冷30分鐘至溫度穩定。  

參數校準:  

校準切片厚度(常用5μm,神經組織可設為8-10μm),檢查刀架角度(推薦5°-8°,角度過大易導致切片褶皺)。  

2.樣本包埋與冷凍  

包埋操作:  

在樣本托上滴適量OCT,放置組織(切面朝上),用預冷鑷子調整位置,避免氣泡。  

將樣本托放入冷凍臺,快速滴加OCT覆蓋組織,直至形成均勻包埋塊(約3分鐘冷凍至固態)。  

冷凍確認:  

輕敲包埋塊,若發出清脆聲響,表明冷凍充分;若發軟,需重新冷凍(可噴液氮輔助,但需避免直接接觸組織)。  

3.切片與展片  

裝載樣本與刀片:  

將冷凍好的樣本托固定在樣本臂上,調整位置使組織切面與刀片平行。  

安裝***次性冰凍切片刀(佩戴防割手套),調節刀片高度至剛接觸樣本表面。  

自動切片流程:  

按下“開始切片”按鈕,儀器自動以設定厚度切取薄片(若切片碎裂,可能因:①樣本冷凍不充分;②刀架角度不當;③切片速度過快)。  

用預冷載玻片輕貼切片,靠OCT黏性吸附切片(載玻片需提前在-10℃冰箱預冷)。  

4.切片后處理  

染色準備:  

切片若用于HE染色,需立即放入固定液(4%多聚甲醛)固定10分鐘;若用于免疫熒光,可直接放入-80℃保存或立即染色。  

質量檢查:  

在顯微鏡下觀察切片平整度、細胞形態(理想切片應無裂痕、細胞無擠壓,核漿分明)。  


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